生物脫氮濾池為什么要通氮?dú)?/h1>
1、低溫對(duì)脫氮工藝的影響
溫度是影響細(xì)菌生長(zhǎng)和代謝的重要環(huán)境條件。絕大多數(shù)微生物正常生長(zhǎng)溫度為20~35℃。溫度主要是通過影響微生物細(xì)胞內(nèi)某些酶的活性而影響微生物的生長(zhǎng)和代謝速率，進(jìn)而影響污泥產(chǎn)率、污染物的去除效率和速率；溫度還會(huì)影響污染物降解途徑、中間產(chǎn)物的形成以及各種物質(zhì)在溶液中的溶解度，以及有可能影響到產(chǎn)氣量和成分等。低溫減弱了微生物體內(nèi)細(xì)胞質(zhì)的流動(dòng)性，進(jìn)而影響了物質(zhì)傳輸?shù)却x過程，并且普遍認(rèn)為低溫將會(huì)導(dǎo)致活性污泥的吸附性能和沉降性能下降，以及使微生物群落發(fā)生變化。低溫對(duì)微生物活性的抑制，不同于高溫帶來的毀滅性影響，其抑制作用通常是可恢復(fù)的。
1.1硝化工藝
生物硝化反應(yīng)可以在4~45℃的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行。氨氧化細(xì)菌（AOB）最佳生長(zhǎng)溫度為25~30℃，亞硝酸氧化細(xì)菌（NOB）的最佳生長(zhǎng)溫度為25~30℃。溫度不但影響硝化菌的生長(zhǎng)，而且影響硝化菌的活性。有研究表明，硝化細(xì)菌最適宜的生長(zhǎng)溫度為25~30℃，當(dāng)溫度小于15℃時(shí)硝化速率明顯下降，硝化細(xì)菌的活性也大幅度降低，當(dāng)溫度低于5℃時(shí)，硝化細(xì)菌的生命活動(dòng)幾乎停止。大量的研究表明，硝化作用會(huì)受到溫度的嚴(yán)重影響，尤其是溫度沖擊的影響更加明顯。由于冬季氣溫較低而未能實(shí)現(xiàn)硝化工藝穩(wěn)定運(yùn)行的案例較為常見。U.Sudarno等考察了溫度變化對(duì)硝化作用的影響，結(jié)果表明，溫度從12.5℃升至40℃，氨氧化速率增加，但當(dāng)溫度下降至6℃時(shí)，硝化菌活性很低。
隨著脫氮工藝的不斷發(fā)展，人們對(duì)硝化工藝提出了更高的要求，希望將硝化作用的反應(yīng)產(chǎn)物控制在亞硝酸鹽階段，作為反硝化或者厭氧氨氧化的前處理技術(shù)，可以節(jié)約曝氣能耗和添加堿量。通過對(duì)兩類硝化細(xì)菌（AOB、NOB）的更多認(rèn)識(shí)，出現(xiàn)了短程硝化工藝。該工藝的核心是選擇性地富集AOB，先抑制再限制最后沖洗出NOB，使得AOB具有較高的數(shù)量而淘汰NOB，從而維持穩(wěn)定的亞硝酸鹽積累。短程硝化過程通常由控制溫度、溶解氧、pH來實(shí)現(xiàn)。溫度控制短程硝化的基礎(chǔ)在于兩類硝化細(xì)菌對(duì)溫度的敏感性不同，25℃以上時(shí)，AOB的最大比生長(zhǎng)速率大于NOB的最大比生長(zhǎng)速率。據(jù)此提出了世界上第一個(gè)工業(yè)化應(yīng)用的短程硝化工藝——SHARON工藝（溫度設(shè)置為30~40℃〔1〕）。因此，在低溫下實(shí)現(xiàn)短程硝化頗具挑戰(zhàn)。
1.2反硝化工藝
低溫對(duì)于反硝化有顯著的抑制作用，JichengZhong等研究了太湖沉積物中的反硝化作用，經(jīng)過數(shù)月的實(shí)驗(yàn)分析發(fā)現(xiàn)反硝化速率呈現(xiàn)季節(jié)性變化。U.Welander等考察了低溫條件下（3~20℃）反硝化工藝的運(yùn)行性能，研究表明在3℃下反應(yīng)器的反硝化速率僅為15℃下的55%。相對(duì)于傳統(tǒng)的缺氧反硝化，溫度對(duì)好氧反硝化的脫氮效率影響不顯著，王弘宇等篩選出的一株好氧反硝化菌，在25~35℃下都能達(dá)到大于78%的脫氮效率。表1概括了不同溫度下的反硝化速率。
1.3厭氧氨氧化工藝
有學(xué)者的研究表明，能夠進(jìn)行厭氧氨氧化反應(yīng)的溫度范圍為6~43℃，最佳溫度為28~40℃。在廢水生物處理中，活化能的取值范圍通常為8.37~83.68kJ/mol，而厭氧氨氧化的活化能為70kJ/mol。因此，厭氧氨氧化屬于對(duì)溫度變化比較敏感的反應(yīng)類型，溫度的降低對(duì)其抑制作用明顯。
低溫對(duì)厭氧氨氧化的影響很大，受低溫抑制后需要較長(zhǎng)時(shí)間才能恢復(fù)。厭氧氨氧化工藝的運(yùn)行溫度從18℃降至15℃時(shí)，亞硝酸鹽不能被完全去除，導(dǎo)致亞硝酸鹽的積累，對(duì)厭氧氨氧化工藝有著顯著的抑制效果，從而引起連鎖效應(yīng)，使得厭氧氨氧化菌失活〔6,25〕。J.Dosta等〔7〕在研究溫度對(duì)厭氧氨氧化工藝的長(zhǎng)期影響時(shí)，將試驗(yàn)溫度由30℃調(diào)至15℃，只有氮容積負(fù)荷（NLR）從0.3kg/（m3?d）大幅降低至0.04kg/（m3?d）才能保證出水水質(zhì)。甚至經(jīng)30d的馴化仍未見好轉(zhuǎn)，將試驗(yàn)溫度調(diào)回至30℃運(yùn)行75d后，污泥活性僅為0.02g/（g?d），處于較低水平。
2、脫氮工藝的低溫運(yùn)行改進(jìn)方法
2.1菌種流加
菌種流加來源于發(fā)酵工藝的菌種擴(kuò)大培養(yǎng)技術(shù)。菌種擴(kuò)大培養(yǎng)技術(shù)是發(fā)酵工業(yè)中廣泛采用的一種菌種應(yīng)用技術(shù)，在批次發(fā)酵中，一般通過“試管→三角瓶→種子罐→發(fā)酵罐”的多級(jí)擴(kuò)增，使菌量滿足生產(chǎn)需要〔26〕。在廢水脫氮工藝中，除裝置內(nèi)菌種自身增殖外，流加菌種有利于加快菌體積累。廢水水質(zhì)復(fù)雜，毒性物質(zhì)、基質(zhì)、pH、溫度等因素的不穩(wěn)定，都會(huì)對(duì)功能菌造成抑制。在受抑制條件下，微生物難以生長(zhǎng)。因此菌種流加的優(yōu)勢(shì)得以體現(xiàn)。
唐崇儉等〔26〕采用菌種流加式厭氧氨氧化工藝處理制藥廢水，廢水中NH4+-N和NO2--N的質(zhì)量濃度分別為120~200mg/L和160~240mg/L，菌種流加速率為0.028g/（L?L?d），容積氮去除負(fù)荷（NRR）由0.1kg/（m3?d）提高至7.9kg/（m3?d）。并且認(rèn)為流加菌種不僅增加了反應(yīng)器內(nèi)的污泥濃度和厭氧氨氧化菌所占比例，可能還帶入了一些未知的生長(zhǎng)因子，才能在如此低的流加速率下，實(shí)現(xiàn)厭氧氨氧化的高效運(yùn)行〔27〕。
菌種流加有望成為低溫下運(yùn)行生物反應(yīng)器的一種有效對(duì)策。何成達(dá)〔28〕的研究表明在低溫期間為保證正常的硝化速率，需要增大反應(yīng)器的容積。通過向活性污泥系統(tǒng)投加硝化菌的方法可有效解決低溫時(shí)期需要延長(zhǎng)泥齡和加大反應(yīng)器容積的問題。
菌種流加的操作靈活，不需要長(zhǎng)期的適應(yīng)調(diào)整時(shí)間，是一種應(yīng)對(duì)低溫沖擊的快速有效方法，但是不能從根本上解決低溫下反應(yīng)器運(yùn)行效率低的問題，僅是增加反應(yīng)器內(nèi)功能菌的數(shù)量及其在混合污泥的比例，緩解低溫對(duì)生物處理的影響，在反應(yīng)器容積有限時(shí)不適合長(zhǎng)期采用。
2.2接種耐冷菌
接種物對(duì)于低溫條件下厭氧反應(yīng)器啟動(dòng)運(yùn)行具有重要的意義〔29〕。耐冷菌能夠耐受溫度波動(dòng)，比較適合低溫廢水的處理。如反硝化耐冷菌——熒光假單胞菌能夠在低于10℃的條件下降解苯二甲酸〔30〕，也有耐冷菌能在低溫下降解甲苯、氯酚等難降解有機(jī)物〔31,32〕。目前的研究重點(diǎn)關(guān)注了接種耐冷菌在低溫產(chǎn)甲烷系統(tǒng)中的意義，如賁岳等〔33〕為確保寒冷地區(qū)污水生物處理系統(tǒng)的有效運(yùn)行，接種耐冷微生物，用于生活污水的處理，在6~10℃下，成功地去除污水中86.7%的COD。左劍惡等〔29〕關(guān)注了嗜冷產(chǎn)甲烷菌及其在廢水厭氧處理中的應(yīng)用，從分離培養(yǎng)及生理生化特性、適冷機(jī)制和分子生物學(xué)研究等方面，對(duì)嗜冷產(chǎn)甲烷菌的研究進(jìn)展進(jìn)行了全面的綜述，并指出接種物對(duì)于低溫條件下厭氧反應(yīng)器的啟動(dòng)很重要。
氨氧化古菌（AOA）是一類能夠在低溫下保持活性的古細(xì)菌。如果能將AOA應(yīng)用到低溫廢水的生物處理中，將會(huì)推動(dòng)生物脫氮工藝的發(fā)展。這可以作為今后研究的一個(gè)重要方向。
2.3生物固定化
經(jīng)固定化處理后，微生物的抗逆性能提高，能耐受外界環(huán)境的變化，從而保持了較高的活性。此外，微生物經(jīng)包埋固定后持留能力得以增強(qiáng)，可望實(shí)現(xiàn)反應(yīng)器的快速啟動(dòng)和高效穩(wěn)定運(yùn)行〔34〕。
通過固定化可以削弱溫度變化對(duì)硝化作用的影響。張爽等〔35〕研究了固定化硝化菌在不同溫度下對(duì)氨氮的去除效能，采用聚乙烯醇-硼酸包埋法固定常溫富集培養(yǎng)的含耐冷菌的硝化污泥，用于處理常溫和低溫生活污水。結(jié)果表明，經(jīng)過固定化處理的硝化菌群即使在低溫條件下，也表現(xiàn)出了較高的硝化效率（＞80%）。也有學(xué)者開展了固定化反硝化細(xì)菌脫氮的研究，結(jié)果表明，經(jīng)過固定化處理，提高了反硝化細(xì)菌對(duì)溫度的適應(yīng)性，固定化反硝化細(xì)菌對(duì)高濃度的銨離子和低溫的耐受性增加〔36〕。B.K.Pathak等〔37〕在低溫厭氧氨氧化的研究中通過接種固定化微生物和厭氧顆粒污泥處理低含氮廢水，在20℃下成功啟動(dòng)厭氧氨氧化，NRR達(dá)到了16.22g/（m3?d），總氮去除率為92%。L.M.Quan等〔38〕以聚乙烯醇（PVA）凝膠和1%的藻酸作為厭氧氨氧化菌的包埋材料，在（25±0.5）℃時(shí)，厭氧氨氧化工藝的NRR達(dá)到了8.0kg/（m3?d）。
固定化是一種有效的技術(shù)手段，然而也會(huì)使微生物活性有所降低，且固定化后，傳質(zhì)阻力會(huì)增大，氧的傳質(zhì)阻礙尤為明顯〔39〕，固定化更能在厭氧條件下發(fā)揮其優(yōu)勢(shì)。此外，其成本也有待技術(shù)經(jīng)濟(jì)評(píng)估。
2.4馴化
馴化就是人為的在某一特定環(huán)境條件長(zhǎng)期處理某一微生物群體，同時(shí)不斷將它們進(jìn)行移種傳代，以達(dá)到累積和選擇合適的自發(fā)突變體的一種古老育種方法〔40〕。微生物的馴化是脫氮工藝運(yùn)用到低溫環(huán)境中的重要措施，使微生物體內(nèi)的酶和細(xì)胞膜的脂類組成能夠適應(yīng)低溫環(huán)境，并能在低溫條件下發(fā)揮作用〔6〕。大量研究表明〔41,42,43〕，通過適當(dāng)?shù)鸟Z化策略，經(jīng)歷一定的馴化時(shí)間，低溫脫氮工藝可以實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定運(yùn)行。
R.D.Jones等〔44〕認(rèn)為，如果將AOB的運(yùn)行溫度從30℃直接降至5℃，會(huì)導(dǎo)致其失活。逐步降低運(yùn)行溫度，AOB可調(diào)整細(xì)胞膜中的脂肪酸類型使其在低溫條件下不易凍結(jié)。后來一些研究得到了與此相悖的結(jié)論〔25,43,44〕。因此有學(xué)者開始探索低溫的馴化策略。
2.4.1逐步馴化
逐步馴化即逐步較緩慢地將工藝溫度由適宜溫度降至目標(biāo)溫度。在馴化微生物適應(yīng)當(dāng)前溫度下再將其溫度降低，進(jìn)一步馴化。尚會(huì)來等〔41〕采用馴化方式，逐步降低溫度，每降1℃就穩(wěn)定一個(gè)多月，半年后不刻意控制溫度，經(jīng)歷了冬季10℃的低溫，成功地穩(wěn)定了常溫、低溫短程硝化反硝化，亞硝化率始終維持在78.8%以上。J.Dosta等〔7〕通過該方法在18℃成功啟動(dòng)并穩(wěn)定運(yùn)行厭氧氨氧化工藝，但將溫度降至15℃時(shí)，工藝系統(tǒng)失穩(wěn)；并認(rèn)為優(yōu)化的操作步驟應(yīng)為：先在厭氧氨氧化最適溫度下，積累足夠的厭氧氨氧化生物量，然后再緩慢馴化微生物適應(yīng)低溫條件。
2.4.2直接馴化
直接馴化就是將反應(yīng)系統(tǒng)直接置于目標(biāo)溫度下進(jìn)行馴化。K.Isaka等〔24,42〕研究了在適度的低溫（20~22℃）下，厭氧生物濾池中利用厭氧氨氧化實(shí)現(xiàn)高效的脫氮。通過直接將接種污泥置于20~22℃的環(huán)境下培養(yǎng)，在經(jīng)過446d后，NLR達(dá)到8.1kg/（m3?d）。還在6℃檢測(cè)到了微生物厭氧氨氧化活性。NLR由22℃時(shí)的2.8kg/（m3?d）降至6℃的0.36kg/（m3?d）。
楊朝暉等〔43〕對(duì)比了兩種馴化策略下厭氧氨氧化工藝的啟動(dòng)時(shí)間，接種以短程硝化-厭氧氨氧化協(xié)同作用為優(yōu)勢(shì)反應(yīng)的厭氧序批生物膜反應(yīng)器中的生物膜（溫度為31℃），置于16℃的生化培養(yǎng)箱中馴化，最快56d成功啟動(dòng)了低溫厭氧氨氧化；接種與前者相同的生物膜，首先置于31℃的生化培養(yǎng)箱中，然后以每12d降低3℃的速度為梯度逐步降溫至16℃，最慢70d馴化結(jié)束，其馴化結(jié)束的標(biāo)志是在16℃的環(huán)境溫度下氨氮的去除效率在1周左右維持穩(wěn)定。
以往的研究表明，微生物對(duì)溫度的逐步降低較為適應(yīng)，如若溫度突然降低，則易引起系統(tǒng)的失穩(wěn)；但較近的研究表明，直接將溫度降至目標(biāo)溫度，馴化的時(shí)間可能會(huì)更短一些。對(duì)此尚需系統(tǒng)的研究來論證，試驗(yàn)現(xiàn)象背后的機(jī)理仍有待揭示。
3結(jié)論
目前低溫廢水生物脫氮技術(shù)的研究已經(jīng)引起眾多學(xué)者的興趣，很多研究結(jié)果表明，溫度的降低會(huì)導(dǎo)致生物脫氮工藝啟動(dòng)時(shí)間顯著延長(zhǎng)，處理負(fù)荷和處理效率大幅降低。通過菌種流加、接種耐冷菌、細(xì)胞固定化和馴化等有效技術(shù)手段，能夠提高低溫廢水生物脫氮工藝的高效性和穩(wěn)定性。結(jié)合目前的研究現(xiàn)狀，低溫脫氮工藝未來的研究可以圍繞下面幾點(diǎn)展開：
（1）耐冷菌的分離富集。將分子生物學(xué)技術(shù)應(yīng)用于耐冷菌的篩選，將篩選出的菌種富集培養(yǎng)，用作接種物或者流加菌種，并建立菌群動(dòng)態(tài)變化指示系統(tǒng)，指導(dǎo)低溫脫氮系統(tǒng)的調(diào)控。
（2）加大古菌的研究力度。研究古菌的培養(yǎng)特性，將可培養(yǎng)的脫氮古菌用于廢水處理，提高系統(tǒng)對(duì)低溫和極端環(huán)境的耐受性。這方面的研究有望成為今后的熱點(diǎn)。
（3）菌種流加過程的優(yōu)化和控制。深入研究厭氧氨氧化菌的生長(zhǎng)和代謝動(dòng)力學(xué)特性，獲得菌種流加的定量參數(shù)；引進(jìn)自動(dòng)化控制技術(shù)，實(shí)現(xiàn)對(duì)該技術(shù)過程的自動(dòng)化控制。
（4）多技術(shù)耦合。通過多種技術(shù)手段的結(jié)合，強(qiáng)化低溫生物脫氮工藝。例如在較低溫度下通過接種低溫優(yōu)勢(shì)菌實(shí)現(xiàn)了工藝啟動(dòng)后，通過菌種流加優(yōu)化低溫生物脫氮過程，提高其抗沖擊能力。
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1、低溫對(duì)脫氮工藝的影響
溫度是影響細(xì)菌生長(zhǎng)和代謝的重要環(huán)境條件。絕大多數(shù)微生物正常生長(zhǎng)溫度為20~35℃。溫度主要是通過影響微生物細(xì)胞內(nèi)某些酶的活性而影響微生物的生長(zhǎng)和代謝速率，進(jìn)而影響污泥產(chǎn)率、污染物的去除效率和速率；溫度還會(huì)影響污染物降解途徑、中間產(chǎn)物的形成以及各種物質(zhì)在溶液中的溶解度，以及有可能影響到產(chǎn)氣量和成分等。低溫減弱了微生物體內(nèi)細(xì)胞質(zhì)的流動(dòng)性，進(jìn)而影響了物質(zhì)傳輸?shù)却x過程，并且普遍認(rèn)為低溫將會(huì)導(dǎo)致活性污泥的吸附性能和沉降性能下降，以及使微生物群落發(fā)生變化。低溫對(duì)微生物活性的抑制，不同于高溫帶來的毀滅性影響，其抑制作用通常是可恢復(fù)的。
1.1硝化工藝
生物硝化反應(yīng)可以在4~45℃的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行。氨氧化細(xì)菌（AOB）最佳生長(zhǎng)溫度為25~30℃，亞硝酸氧化細(xì)菌（NOB）的最佳生長(zhǎng)溫度為25~30℃。溫度不但影響硝化菌的生長(zhǎng)，而且影響硝化菌的活性。有研究表明，硝化細(xì)菌最適宜的生長(zhǎng)溫度為25~30℃，當(dāng)溫度小于15℃時(shí)硝化速率明顯下降，硝化細(xì)菌的活性也大幅度降低，當(dāng)溫度低于5℃時(shí)，硝化細(xì)菌的生命活動(dòng)幾乎停止。大量的研究表明，硝化作用會(huì)受到溫度的嚴(yán)重影響，尤其是溫度沖擊的影響更加明顯。由于冬季氣溫較低而未能實(shí)現(xiàn)硝化工藝穩(wěn)定運(yùn)行的案例較為常見。U.Sudarno等考察了溫度變化對(duì)硝化作用的影響，結(jié)果表明，溫度從12.5℃升至40℃，氨氧化速率增加，但當(dāng)溫度下降至6℃時(shí)，硝化菌活性很低。
隨著脫氮工藝的不斷發(fā)展，人們對(duì)硝化工藝提出了更高的要求，希望將硝化作用的反應(yīng)產(chǎn)物控制在亞硝酸鹽階段，作為反硝化或者厭氧氨氧化的前處理技術(shù)，可以節(jié)約曝氣能耗和添加堿量。通過對(duì)兩類硝化細(xì)菌（AOB、NOB）的更多認(rèn)識(shí)，出現(xiàn)了短程硝化工藝。該工藝的核心是選擇性地富集AOB，先抑制再限制最后沖洗出NOB，使得AOB具有較高的數(shù)量而淘汰NOB，從而維持穩(wěn)定的亞硝酸鹽積累。短程硝化過程通常由控制溫度、溶解氧、pH來實(shí)現(xiàn)。溫度控制短程硝化的基礎(chǔ)在于兩類硝化細(xì)菌對(duì)溫度的敏感性不同，25℃以上時(shí)，AOB的最大比生長(zhǎng)速率大于NOB的最大比生長(zhǎng)速率。據(jù)此提出了世界上第一個(gè)工業(yè)化應(yīng)用的短程硝化工藝——SHARON工藝（溫度設(shè)置為30~40℃〔1〕）。因此，在低溫下實(shí)現(xiàn)短程硝化頗具挑戰(zhàn)。
1.2反硝化工藝
低溫對(duì)于反硝化有顯著的抑制作用，JichengZhong等研究了太湖沉積物中的反硝化作用，經(jīng)過數(shù)月的實(shí)驗(yàn)分析發(fā)現(xiàn)反硝化速率呈現(xiàn)季節(jié)性變化。U.Welander等考察了低溫條件下（3~20℃）反硝化工藝的運(yùn)行性能，研究表明在3℃下反應(yīng)器的反硝化速率僅為15℃下的55%。相對(duì)于傳統(tǒng)的缺氧反硝化，溫度對(duì)好氧反硝化的脫氮效率影響不顯著，王弘宇等篩選出的一株好氧反硝化菌，在25~35℃下都能達(dá)到大于78%的脫氮效率。表1概括了不同溫度下的反硝化速率。
1.3厭氧氨氧化工藝
有學(xué)者的研究表明，能夠進(jìn)行厭氧氨氧化反應(yīng)的溫度范圍為6~43℃，最佳溫度為28~40℃。在廢水生物處理中，活化能的取值范圍通常為8.37~83.68kJ/mol，而厭氧氨氧化的活化能為70kJ/mol。因此，厭氧氨氧化屬于對(duì)溫度變化比較敏感的反應(yīng)類型，溫度的降低對(duì)其抑制作用明顯。
低溫對(duì)厭氧氨氧化的影響很大，受低溫抑制后需要較長(zhǎng)時(shí)間才能恢復(fù)。厭氧氨氧化工藝的運(yùn)行溫度從18℃降至15℃時(shí)，亞硝酸鹽不能被完全去除，導(dǎo)致亞硝酸鹽的積累，對(duì)厭氧氨氧化工藝有著顯著的抑制效果，從而引起連鎖效應(yīng)，使得厭氧氨氧化菌失活〔6,25〕。J.Dosta等〔7〕在研究溫度對(duì)厭氧氨氧化工藝的長(zhǎng)期影響時(shí)，將試驗(yàn)溫度由30℃調(diào)至15℃，只有氮容積負(fù)荷（NLR）從0.3kg/（m3?d）大幅降低至0.04kg/（m3?d）才能保證出水水質(zhì)。甚至經(jīng)30d的馴化仍未見好轉(zhuǎn)，將試驗(yàn)溫度調(diào)回至30℃運(yùn)行75d后，污泥活性僅為0.02g/（g?d），處于較低水平。
2、脫氮工藝的低溫運(yùn)行改進(jìn)方法
2.1菌種流加
菌種流加來源于發(fā)酵工藝的菌種擴(kuò)大培養(yǎng)技術(shù)。菌種擴(kuò)大培養(yǎng)技術(shù)是發(fā)酵工業(yè)中廣泛采用的一種菌種應(yīng)用技術(shù)，在批次發(fā)酵中，一般通過“試管→三角瓶→種子罐→發(fā)酵罐”的多級(jí)擴(kuò)增，使菌量滿足生產(chǎn)需要〔26〕。在廢水脫氮工藝中，除裝置內(nèi)菌種自身增殖外，流加菌種有利于加快菌體積累。廢水水質(zhì)復(fù)雜，毒性物質(zhì)、基質(zhì)、pH、溫度等因素的不穩(wěn)定，都會(huì)對(duì)功能菌造成抑制。在受抑制條件下，微生物難以生長(zhǎng)。因此菌種流加的優(yōu)勢(shì)得以體現(xiàn)。
唐崇儉等〔26〕采用菌種流加式厭氧氨氧化工藝處理制藥廢水，廢水中NH4+-N和NO2--N的質(zhì)量濃度分別為120~200mg/L和160~240mg/L，菌種流加速率為0.028g/（L?L?d），容積氮去除負(fù)荷（NRR）由0.1kg/（m3?d）提高至7.9kg/（m3?d）。并且認(rèn)為流加菌種不僅增加了反應(yīng)器內(nèi)的污泥濃度和厭氧氨氧化菌所占比例，可能還帶入了一些未知的生長(zhǎng)因子，才能在如此低的流加速率下，實(shí)現(xiàn)厭氧氨氧化的高效運(yùn)行〔27〕。
菌種流加有望成為低溫下運(yùn)行生物反應(yīng)器的一種有效對(duì)策。何成達(dá)〔28〕的研究表明在低溫期間為保證正常的硝化速率，需要增大反應(yīng)器的容積。通過向活性污泥系統(tǒng)投加硝化菌的方法可有效解決低溫時(shí)期需要延長(zhǎng)泥齡和加大反應(yīng)器容積的問題。
菌種流加的操作靈活，不需要長(zhǎng)期的適應(yīng)調(diào)整時(shí)間，是一種應(yīng)對(duì)低溫沖擊的快速有效方法，但是不能從根本上解決低溫下反應(yīng)器運(yùn)行效率低的問題，僅是增加反應(yīng)器內(nèi)功能菌的數(shù)量及其在混合污泥的比例，緩解低溫對(duì)生物處理的影響，在反應(yīng)器容積有限時(shí)不適合長(zhǎng)期采用。
2.2接種耐冷菌
接種物對(duì)于低溫條件下厭氧反應(yīng)器啟動(dòng)運(yùn)行具有重要的意義〔29〕。耐冷菌能夠耐受溫度波動(dòng)，比較適合低溫廢水的處理。如反硝化耐冷菌——熒光假單胞菌能夠在低于10℃的條件下降解苯二甲酸〔30〕，也有耐冷菌能在低溫下降解甲苯、氯酚等難降解有機(jī)物〔31,32〕。目前的研究重點(diǎn)關(guān)注了接種耐冷菌在低溫產(chǎn)甲烷系統(tǒng)中的意義，如賁岳等〔33〕為確保寒冷地區(qū)污水生物處理系統(tǒng)的有效運(yùn)行，接種耐冷微生物，用于生活污水的處理，在6~10℃下，成功地去除污水中86.7%的COD。左劍惡等〔29〕關(guān)注了嗜冷產(chǎn)甲烷菌及其在廢水厭氧處理中的應(yīng)用，從分離培養(yǎng)及生理生化特性、適冷機(jī)制和分子生物學(xué)研究等方面，對(duì)嗜冷產(chǎn)甲烷菌的研究進(jìn)展進(jìn)行了全面的綜述，并指出接種物對(duì)于低溫條件下厭氧反應(yīng)器的啟動(dòng)很重要。
氨氧化古菌（AOA）是一類能夠在低溫下保持活性的古細(xì)菌。如果能將AOA應(yīng)用到低溫廢水的生物處理中，將會(huì)推動(dòng)生物脫氮工藝的發(fā)展。這可以作為今后研究的一個(gè)重要方向。
2.3生物固定化
經(jīng)固定化處理后，微生物的抗逆性能提高，能耐受外界環(huán)境的變化，從而保持了較高的活性。此外，微生物經(jīng)包埋固定后持留能力得以增強(qiáng)，可望實(shí)現(xiàn)反應(yīng)器的快速啟動(dòng)和高效穩(wěn)定運(yùn)行〔34〕。
通過固定化可以削弱溫度變化對(duì)硝化作用的影響。張爽等〔35〕研究了固定化硝化菌在不同溫度下對(duì)氨氮的去除效能，采用聚乙烯醇-硼酸包埋法固定常溫富集培養(yǎng)的含耐冷菌的硝化污泥，用于處理常溫和低溫生活污水。結(jié)果表明，經(jīng)過固定化處理的硝化菌群即使在低溫條件下，也表現(xiàn)出了較高的硝化效率（＞80%）。也有學(xué)者開展了固定化反硝化細(xì)菌脫氮的研究，結(jié)果表明，經(jīng)過固定化處理，提高了反硝化細(xì)菌對(duì)溫度的適應(yīng)性，固定化反硝化細(xì)菌對(duì)高濃度的銨離子和低溫的耐受性增加〔36〕。B.K.Pathak等〔37〕在低溫厭氧氨氧化的研究中通過接種固定化微生物和厭氧顆粒污泥處理低含氮廢水，在20℃下成功啟動(dòng)厭氧氨氧化，NRR達(dá)到了16.22g/（m3?d），總氮去除率為92%。L.M.Quan等〔38〕以聚乙烯醇（PVA）凝膠和1%的藻酸作為厭氧氨氧化菌的包埋材料，在（25±0.5）℃時(shí)，厭氧氨氧化工藝的NRR達(dá)到了8.0kg/（m3?d）。
固定化是一種有效的技術(shù)手段，然而也會(huì)使微生物活性有所降低，且固定化后，傳質(zhì)阻力會(huì)增大，氧的傳質(zhì)阻礙尤為明顯〔39〕，固定化更能在厭氧條件下發(fā)揮其優(yōu)勢(shì)。此外，其成本也有待技術(shù)經(jīng)濟(jì)評(píng)估。
2.4馴化
馴化就是人為的在某一特定環(huán)境條件長(zhǎng)期處理某一微生物群體，同時(shí)不斷將它們進(jìn)行移種傳代，以達(dá)到累積和選擇合適的自發(fā)突變體的一種古老育種方法〔40〕。微生物的馴化是脫氮工藝運(yùn)用到低溫環(huán)境中的重要措施，使微生物體內(nèi)的酶和細(xì)胞膜的脂類組成能夠適應(yīng)低溫環(huán)境，并能在低溫條件下發(fā)揮作用〔6〕。大量研究表明〔41,42,43〕，通過適當(dāng)?shù)鸟Z化策略，經(jīng)歷一定的馴化時(shí)間，低溫脫氮工藝可以實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定運(yùn)行。
R.D.Jones等〔44〕認(rèn)為，如果將AOB的運(yùn)行溫度從30℃直接降至5℃，會(huì)導(dǎo)致其失活。逐步降低運(yùn)行溫度，AOB可調(diào)整細(xì)胞膜中的脂肪酸類型使其在低溫條件下不易凍結(jié)。后來一些研究得到了與此相悖的結(jié)論〔25,43,44〕。因此有學(xué)者開始探索低溫的馴化策略。
2.4.1逐步馴化
逐步馴化即逐步較緩慢地將工藝溫度由適宜溫度降至目標(biāo)溫度。在馴化微生物適應(yīng)當(dāng)前溫度下再將其溫度降低，進(jìn)一步馴化。尚會(huì)來等〔41〕采用馴化方式，逐步降低溫度，每降1℃就穩(wěn)定一個(gè)多月，半年后不刻意控制溫度，經(jīng)歷了冬季10℃的低溫，成功地穩(wěn)定了常溫、低溫短程硝化反硝化，亞硝化率始終維持在78.8%以上。J.Dosta等〔7〕通過該方法在18℃成功啟動(dòng)并穩(wěn)定運(yùn)行厭氧氨氧化工藝，但將溫度降至15℃時(shí)，工藝系統(tǒng)失穩(wěn)；并認(rèn)為優(yōu)化的操作步驟應(yīng)為：先在厭氧氨氧化最適溫度下，積累足夠的厭氧氨氧化生物量，然后再緩慢馴化微生物適應(yīng)低溫條件。
2.4.2直接馴化
直接馴化就是將反應(yīng)系統(tǒng)直接置于目標(biāo)溫度下進(jìn)行馴化。K.Isaka等〔24,42〕研究了在適度的低溫（20~22℃）下，厭氧生物濾池中利用厭氧氨氧化實(shí)現(xiàn)高效的脫氮。通過直接將接種污泥置于20~22℃的環(huán)境下培養(yǎng)，在經(jīng)過446d后，NLR達(dá)到8.1kg/（m3?d）。還在6℃檢測(cè)到了微生物厭氧氨氧化活性。NLR由22℃時(shí)的2.8kg/（m3?d）降至6℃的0.36kg/（m3?d）。
楊朝暉等〔43〕對(duì)比了兩種馴化策略下厭氧氨氧化工藝的啟動(dòng)時(shí)間，接種以短程硝化-厭氧氨氧化協(xié)同作用為優(yōu)勢(shì)反應(yīng)的厭氧序批生物膜反應(yīng)器中的生物膜（溫度為31℃），置于16℃的生化培養(yǎng)箱中馴化，最快56d成功啟動(dòng)了低溫厭氧氨氧化；接種與前者相同的生物膜，首先置于31℃的生化培養(yǎng)箱中，然后以每12d降低3℃的速度為梯度逐步降溫至16℃，最慢70d馴化結(jié)束，其馴化結(jié)束的標(biāo)志是在16℃的環(huán)境溫度下氨氮的去除效率在1周左右維持穩(wěn)定。
以往的研究表明，微生物對(duì)溫度的逐步降低較為適應(yīng)，如若溫度突然降低，則易引起系統(tǒng)的失穩(wěn)；但較近的研究表明，直接將溫度降至目標(biāo)溫度，馴化的時(shí)間可能會(huì)更短一些。對(duì)此尚需系統(tǒng)的研究來論證，試驗(yàn)現(xiàn)象背后的機(jī)理仍有待揭示。
3結(jié)論
目前低溫廢水生物脫氮技術(shù)的研究已經(jīng)引起眾多學(xué)者的興趣，很多研究結(jié)果表明，溫度的降低會(huì)導(dǎo)致生物脫氮工藝啟動(dòng)時(shí)間顯著延長(zhǎng)，處理負(fù)荷和處理效率大幅降低。通過菌種流加、接種耐冷菌、細(xì)胞固定化和馴化等有效技術(shù)手段，能夠提高低溫廢水生物脫氮工藝的高效性和穩(wěn)定性。結(jié)合目前的研究現(xiàn)狀，低溫脫氮工藝未來的研究可以圍繞下面幾點(diǎn)展開：
（1）耐冷菌的分離富集。將分子生物學(xué)技術(shù)應(yīng)用于耐冷菌的篩選，將篩選出的菌種富集培養(yǎng)，用作接種物或者流加菌種，并建立菌群動(dòng)態(tài)變化指示系統(tǒng)，指導(dǎo)低溫脫氮系統(tǒng)的調(diào)控。
（2）加大古菌的研究力度。研究古菌的培養(yǎng)特性，將可培養(yǎng)的脫氮古菌用于廢水處理，提高系統(tǒng)對(duì)低溫和極端環(huán)境的耐受性。這方面的研究有望成為今后的熱點(diǎn)。
（3）菌種流加過程的優(yōu)化和控制。深入研究厭氧氨氧化菌的生長(zhǎng)和代謝動(dòng)力學(xué)特性，獲得菌種流加的定量參數(shù)；引進(jìn)自動(dòng)化控制技術(shù)，實(shí)現(xiàn)對(duì)該技術(shù)過程的自動(dòng)化控制。
（4）多技術(shù)耦合。通過多種技術(shù)手段的結(jié)合，強(qiáng)化低溫生物脫氮工藝。例如在較低溫度下通過接種低溫優(yōu)勢(shì)菌實(shí)現(xiàn)了工藝啟動(dòng)后，通過菌種流加優(yōu)化低溫生物脫氮過程，提高其抗沖擊能力。